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【MDCK细胞无血清培养基   规格与保存】

【MDCK细胞无血清培养基   用途与描述】

MDCK细胞无血清培养基是一款专门用于培养MDCK细胞的无血清培养基。

MDCK细胞无血清培养基中不含胎牛血清成分，细胞培养过程中也不需要添加血清，无血清培养的MDCK细胞可达到完全培养基（DMEM+10%FBS）培养的状态，连续传代50代，细胞特性无改变，生长速率优于完全培养基。MDCK细胞的倍增时间小于20小时。

MDCK细胞无血清培养基化学成分限定，在流感病毒分离中能排除血清中类淀粉蛋白P等物质对病毒吸附的影响，同时，细胞可以直接转入无血清培养基中培养，不需要经过血清浓度逐步降低的驯化过程，能帮助疾控、高校和科研院所的工作人员提高实验进度。

【MDCK细胞无血清培养基   使用方法】

MDCK细胞无血清培养基的使用方法跟完全培养基（DMEM+10%FBS）的相同。
不经过血清驯化的MDCK细胞，前5代左右（与MDCK细胞的初始状态有关）状态可能会稍差。

1、MDCK细胞复苏

1）从液氮罐中取出冻存管迅速置于37℃水浴锅中，使管中的液体在1min内融化。

2）在超净工作台中用无菌吸管吸取10mL预温的MDCK无血清培养基到15mL离心管中，冻存管用75%酒精擦拭表面后，将细胞悬液加入15mL离心管中，吹吸混匀。

3）800rpm离心3min，去除上清液，用6mL预温的无血清培养基重悬细胞，接种于T25细胞培养瓶中，接种细胞密度为5×10⁵cells/mL。

4） 37℃,5%CO₂ 培养箱中培养，次日更换一次培养液，继续培养1-2天至细胞铺满瓶底的80%-90%进行传代。

2、MDCK细胞传代（以T25瓶为例）

1）处于对数生长期的细胞长至融合度达到80％-90％时，弃去培养液，用PBS或不含钙镁的Hank's液清洗细胞3遍。

2）加入1mL基因重组胰蛋白酶，37℃,5%CO₂培养箱中消化至细胞收缩变圆，轻拍培养瓶，镜下可观察到细胞移动加入培养基终止消化。

3）如果以1：6比例传代，加入35mL MDCK细胞无血清培养基。如果以1：4比例传代，需加25mL MDCK细胞无血清培养基。

4）分瓶后，置于37℃，5% CO₂培养箱中培养，细胞长满瓶底80%-90%后进行下一次传代（一般2-3天传代一次）。

【MDCK细胞无血清培养基   实验数据】

	MDCK在无血清培养基中的培养状态（200×镜下）		MDCK在需血清培养基中的培养状态（200×镜下）
	MDCK细胞在无血清培养基中传代第10代		MDCK细胞在无血清培养基中传代第20代
	MDCK细胞在无血清培养基中传代第30代		MDCK细胞在无血清培养基中传代第32代